INFEKTIONSSEROLOGIE – BAKTERIOLOGIE – BORRELIA | ANAPLASMA

Wichtige Punkte

• Lyme-Borreliose und Anaplasmose sind durch Zecken übertragene Infektionen, die bei fehlender rascher Behandlung potenziell schwere Langzeitfolgen haben können.
• Die zweistufige Testung verwendet ein ELISA-Screening gefolgt von einer Bestätigung mittels Immunoblot, um falsch-positive Ergebnisse zu reduzieren.
• Die Sensitivität der Tests für Lyme-Borreliose liegt bei frühzeitiger lokalisierter Infektion nur bei 20–50 %, sodass eine wiederholte Testung nach 2–3 Wochen erforderlich sein kann.
• Bei Verdacht auf Neuroborreliose kann die Untersuchung der Liquor cerebrospinalis mit Berechnung des Antikörperindex die intrathekale Antikörperproduktion bestätigen.
• Tests mit rekombinanten Antigenen bieten eine höhere diagnostische Sicherheit, wobei mehrere Assays eine Sensitivität und Spezifität von über 95 % aufweisen.

Inhaltsverzeichnis

• Hintergrund: Zwei durch Zecken übertragene Erkrankungen
• Die Phasen der Lyme-Borreliose
• Humane granulozytäre Anaplasmose (HGA)
• Wie Ärzte diese Infektionen diagnostizieren
• Test-Sensitivität in den verschiedenen Krankheitsstadien
• Die Wissenschaft hinter den Tests: Wichtige Antigene
• Erklärung der ELISA-Testung
• Erklärung der Immunoblot- (Western Blot-) Testung
• Automatisierte Testung mit BlueBLOT-LINE
• Microblot-Array: Fortschrittliche Multiplex-Technologie
• Neuroborreliose und der Antikörperindex
• Klinische Implikationen für Patienten
• Einschränkungen und wichtige Hinweise
• Empfehlungen für Patientinnen und Patienten
• Quelleninformationen

Hintergrund: Zwei durch Zecken übertragene Erkrankungen

Lyme-Borreliose (häufig als Lyme-Krankheit bezeichnet) ist eine multisystemische Infektionskrankheit, die durch spiralförmige Bakterien namens Borrelia burgdorferi (eine Art der Spirochäten) verursacht wird. Die Infektion wird auf den Menschen durch den Stich von Zecken der Gattung Ixodes übertragen – denselben Hirschzecken, die in vielen Teilen der Welt verbreitet sind.

Die Lyme-Krankheit äußert sich sowohl in frühen als auch in späten klinischen Symptomen, die praktisch jedes System im Körper betreffen können. Humane granulozytäre Anaplasmose (HGA) ist eine separate Erkrankung, die durch ein anderes Bakterium namens Anaplasma phagocytophilum verursacht wird. In vielen Regionen dient die Holzbockzecke, Ixodes ricinus, als Vektor für beide Erkrankungen. Während die Zecke Blut saugt, gelangen die Bakterien in das kardiovaskuläre System des Wirts, wo sie Blutzellen angreifen.

Diese Infektionen sind für Patientinnen und Patienten relevant, da sie oft übersehen oder falsch diagnostiziert werden. Die Symptome können viele andere Erkrankungen imitieren, und Antikörpertests sind nicht immer eindeutig. Ein Verständnis dafür, wie die Tests funktionieren, kann Ihnen helfen, die richtigen Fragen zu stellen, wenn Sie oder eine nahestehende Person auf eine durch Zecken übertragene Erkrankung untersucht werden.

Die Phasen der Lyme-Borreliose

Die Lyme-Krankheit verläuft in drei distincten Phasen, jede mit ihren eigenen Symptomen und diagnostischen Herausforderungen.

Frühe lokalisierte Infektion (Tage bis Wochen)

Diese erste Phase ist durch Erythema migrans (EM) gekennzeichnet, den klassischen "Bull's-eye"-Ausschlag. Wichtig ist, dass dieser Ausschlag nur bei 50 % der Patientinnen und Patienten auftritt. Zu den frühen Symptomen können auch "grippeähnliche" Beschwerden, Kopfschmerzen und geschwollene Lymphknoten (Lymphadenitis) gehören. Das bedeutet, dass die Hälfte aller infizierten Patientinnen und Patienten möglicherweise nicht den typischen Ausschlag aufweist, den die meisten Menschen mit der Lyme-Krankheit in Verbindung bringen.

Frühe disseminierte Infektion (Wochen bis Monate)

In dieser Phase breiten sich Borrelia-Bakterien durch Blutgefäße und das Lymphsystem aus, um das zentrale Nervensystem (ZNS), Gelenke, Herz, Augen, Haut und andere Organe zu erreichen. Die am häufigsten diagnostizierten Symptome in diesem Stadium sind:

• Neuroborreliose – Infektion des Nervensystems
• Paresis neurofacialis – Gesichtsnervenlähmung (Bell-Lähmung)
• Borrelien-Lymphozytom – bläulich-rötliche Schwellungen, oft an den Ohrläppchen oder Knöcheln
• Bannwarth-Syndrom – eine Kombination aus Nervenschmerzen, Meningitis und Gesichtslähmung

Zusätzliche Symptome können Hautveränderungen (in etwa 20 % der Fälle) und unspezifische Beschwerden umfassen, die vielen anderen Erkrankungen ähneln: geschwollene Drüsen, Kopfschmerzen, Muskelschmerzen, Übelkeit, Erbrechen, Bauchprobleme und häufige Paresen (Muskelschwäche oder teilweise Lähmung).

Späte disseminierte Infektion (Monate bis Jahre)

Ohne wirksame Behandlung kann die Erkrankung in eine späte Phase übergehen, die Monate oder sogar Jahre andauern kann. Die typischsten immunologischen Veränderungen, die in diesem Stadium diagnostiziert werden, sind:

• Acrodermatitis chronica atrophicans (ACA)—chronische Hautveränderungen, die zu einer Verdünnung und Verfärbung der Haut führen können
• Chronische Neuroborreliose—anhaltende Beteiligung des Nervensystems
• Borrelien-Arthritis—Gelenkentzündung, häufig an den Knien

Umfangreiche Studien haben gezeigt, dass verschiedene Borrelia-Genospezies (Untertypen) mit unterschiedlichen klinischen Erscheinungsformen verbunden sind. B. garinii ist mit neurologischen Symptomen verbunden, B. afzelii mit chronischen Hauterkrankungen (insbesondere ACA), und B. burgdorferi sensu stricto steht hauptsächlich in Zusammenhang mit Gelenkverletzungen. Alle Genospezies können jedoch ein Erythema migrans und viele andere klinische Manifestationen verursachen.

Humane Granulozytäre Anaplasmose (HGA)

Die Anaplasmose ist eine akute Erkrankung, die sich typischerweise innerhalb von einer Woche nach einem Zeckenstich entwickelt. Die Symptome können von völlig asymptomatischen Formen bis hin zu schweren, lebensbedrohlichen Zuständen mit Atemwegs-, Magen-Darm-, Nieren- und neurologischen Symptomen reichen.

Das erste und häufigste Zeichen ist ein Fieberzustand, der mindestens 3 bis 7 Tage nach einem Zeckenstich anhält. Schwere Komplikationen sind bei Patienten mit geschwächtem Immunsystem (Immundefizit), Personen, die sich einer Transplantation unterzogen haben, und Patienten ohne Milz wahrscheinlicher. Die Erkrankung verläuft in der Regel akut; jedoch können komplizierte Fälle, die nicht rechtzeitig behandelt werden, chronisch werden und sogar lebensbedrohlich sein.

Ein bemerkenswerter epidemiologischer Befund ist, dass Männer viermal häufiger als Frauen (4:1) an einer Anaplasmose erkranken.

Die Diagnose einer HGA allein auf Basis klinischer Symptome ist sehr schwierig, weshalb laborchemische Befunde unerlässlich sind. Charakteristische laborchemische Befunde umfassen:

• Leukopenie—niedrige Anzahl weißer Blutkörperchen
• Thrombozytopenie—niedrige Anzahl von Blutplättchen
• Erhöhte Lebertransaminasen—Hinweise auf eine Beteiligung der Leber in Bluttests

Die Antikörperproduktion beginnt innerhalb der ersten 2 Wochen nach Krankheitsbeginn. Allerdings testen nur 30–60 % der Patienten in der akuten Phase positiv (seropositiv). Diese Zahl steigt während der Konvaleszenz (der Erholungsphase) auf 70–90 % an, was wichtige Auswirkungen darauf hat, wann Tests durchgeführt werden sollten.

Wie Ärzte diese Infektionen diagnostizieren

Die Diagnose von Lyme-Borreliose und Anaplasmose basiert auf drei Elementen: der Krankengeschichte des Patienten (Anamnese), dem klinischen Bild (Symptome und körperliche Befunde) und den Ergebnissen laborchemischer Tests. Die derzeitigen diagnostischen Methoden der Wahl sind der Nachweis spezifischer IgG- und IgM-Antikörper mittels ELISA, gefolgt von dem Bestätigungstest von Antikörpern gegen spezifische Antigene mittels Immunoblot. Die direkte Anzucht der Bakterien oder die Elektronenmikroskopie ist für den Routineeinsatz nicht praktikabel.

Die serologische Diagnose einer Borreliose ist aus mehreren Gründen herausfordernd:

• Die große genetische Vielfalt der Spezies Borrelia burgdorferi sensu lato
• Mögliche Kreuzreaktivität mit nicht verwandten Antigenen anderer Mikroorganismen
• Der hohe Gehalt an Hitzeschockproteinen bei Borrelia, die unspezifische Immunantworten auslösen können
• Die stark variierende individuelle serologische Reaktivität
• Extrem langsame Antikörperproduktion in der frühen Phase der Erkrankung
• IgG- und IgM-Antikörper können länger als zehn Jahre nachweisbar bleiben, was die Unterscheidung zwischen einer vergangenen und einer aktiven Infektion erschwert

Der zweistufige Testansatz

Um die Genauigkeit zu maximieren, wenden Ärzte eine zweistufige Strategie zur Antikörperdetektion an. Dieser Ansatz wird von europäischen und amerikanischen Leitlinien empfohlen (zusammengefasst von Eldin et al., 2019).

1. Stufe 1 (Screening): Proben werden mit der ELISA-Methode getestet, die Patienten basierend auf ihrem Antikörperstatus in positive oder negative Gruppen einteilt.
2. Stufe 2 (Bestätigung): Positive und grenzwertige Ergebnisse werden mittels Immunoblot bestätigt, der Antikörper gegen spezifische Borrelia-Antigene nachweist.

Wenn der erste Test negativ ist, die Symptome des Patienten jedoch anhalten, sollte zwei bis drei Wochen später eine zweite (Kontroll-)Blutprobe entnommen und erneut getestet werden. Dies ist wichtig, da Antikörperspiegel in den frühesten Stadien einer Infektion nicht nachweisbar sein können.

Die Anzahl der Diskrepanzen zwischen Immunoblot-Ergebnissen (Stufe 2) und ELISA-Ergebnissen (Stufe 1) wird verringert, wenn die ELISA-Methode auf rekombinanten Antigenen basiert, wie es bei den in diesem Artikel beschriebenen TestLine-Assays der Fall ist.

Ein einzelnes Testergebnis stellt keine Diagnose dar – es unterstützt sie. Die endgültige Diagnose stützt sich auf das umfassende klinische Bild des Patienten, nicht nur auf das serologische Ergebnis.

Testempfindlichkeit in den verschiedenen Krankheitsstadien

Eine der wichtigsten Erkenntnisse für Patienten ist, dass die Empfindlichkeit dieser Tests – ihre Fähigkeit, die Erkrankung bei Vorliegen nachzuweisen – je nach Stadium der Krankheit erheblich variiert. Gemäß den deutschen MiQ-Qualitätsstandards beträgt die diagnostische Empfindlichkeit für verschiedene Formen der Lyme-Borreliose:

• Lokalisierte Frühinfektion (Erythema migrans, Borrelien-Lymphozytom, multiple EM): 20–50 %
• Disseminierte Frühinfektion (Neuroborreliose, Lyme-Arthritis, Kardiitis): 70–90 %
• Disseminierte Spätinfektion (Acrodermatitis chronica atrophicans, späte Neuroborreliose): 90–100 %

Mit anderen Worten: Ein negatives Testergebnis in der frühen Phase der Erkrankung schließt eine Lyme-Borreliose nicht aus. Deshalb ist die wiederholte Testung nach 2–3 Wochen bei anhaltenden Symptomen so wichtig.

Die Wissenschaft hinter den Tests: Wichtige Antigene

Moderne diagnostische Tests suchen nicht nur nach beliebigen Antikörpern, sondern nach Antikörpern gegen spezifische Proteine (Antigene) der Bakterien. Jedes Antigen erscheint zu unterschiedlichen Zeitpunkten während der Infektion und ist mit verschiedenen klinischen Manifestationen verbunden. Hier sind die wichtigsten Borrelia-Antigene, die in diesen Tests verwendet werden:

• VlsE (Ba, Bg, Bs) – das Hauptantigen der frühen und späten Antikörperantwort. Es erhöht die Testempfindlichkeit erheblich; etwa 90 % der positiven Seren- und Liquorproben reagieren auf diese Antigenbande.
• p83 – das Hauptextrazellulärprotein, ein Antigen der späten Antikörperantwort, das hochspezifisch für die Neuroborreliose ist.
• p58 (OppA-2) – ein Membrantransporter, der als Marker für das disseminierte Stadium der Lyme-Borreliose gilt.
• p41 (Ba, Bs)—der innere Teil des Flagellins, ein hochspezifisches Antigen der frühen Antikörperantwort.
• p39 (BmpA)—ein Glykosaminopeptid-Rezeptor und ein Antigen der späten Antwort. Es ist für fortgeschrittene disseminierte Lyme-Borreliose bedeutsam und wird häufig mit Lyme-Arthritis in Verbindung gebracht.
• OspA (Ba, Bg, Bs)—Oberflächenprotein A, ein Antigen der späten Antwort, typisch für Neuroborreliose.
• OspB—Oberflächenprotein B, ein Antigen der späten Antwort.
• OspC (Ba, Bg, Bs, Bsp)—Oberflächenprotein C, das immunodominante Marker der IgM-Antikörperantwort (die frühesten produzierten Antikörper).
• OspE—Oberflächenprotein E.
• NapA—Neutrophil-aktivierendes Protein A, ein starkes Immunogen und Hauptmarker der Pathogenese von Lyme-Arthritis.
• p17 (DbpA)—Decorin-bindendes Protein A, beteiligt an sowohl frühen als auch späten Antikörperantworten und typisch für Neuroborreliose.

Die Buchstaben Ba, Bg, Bs und Bsp beziehen sich auf die spezifischen bakteriellen Unterarten, von denen das Antigen stammt: B. afzelii, B. garinii, B. burgdorferi sensu stricto und B. spielmanii.

Anaplasma und kreuzreaktive Antigene

Für die Anaplasmose sind die Schlüsselantigene p44 (das Hauptantigen der Antikörperantwort auf HGA), OmpA (ein äußeres Membranprotein und signifikanter Virulenzmarker) und Asp62 (ein Membrantransporter-Oberflächenprotein).

Die Tests umfassen auch Antigene zum Nachweis von Kreuzreaktionen mit anderen Infektionen: TpN17, ein hochspezifisches Membranprotein von Treponema pallidum (dem Bakterium, das Syphilis verursacht), und VCA-p18, ein viraler Kapsidantigen, der EBV-Infektionen (Epstein-Barr-Virus) nachweist. Die Aufnahme dieser Antigene hilft, falsch-positive Ergebnisse zu vermeiden, die durch Antikörper gegen nicht verwandte Infektionen verursacht werden.

ELISA-Testverfahren erklärt

ELISA (Enzymimmunoassay) ist der Erstlinien-Screentest. Die TestLine EIA-Assays basieren auf einer Sandwich-ELISA-Methode. Sie sind für den Nachweis von IgG- und IgM-Antikörpern in menschlichem Serum, Plasma, Liquor cerebrospinalis oder Synovialflüssigkeit konzipiert.

Übersicht über das patientenfreundliche Protokoll

Der Testprozess ist unkompliziert und dauert insgesamt etwa 1,5 Stunden:

1. Proben werden verdünnt: Serum/Plasma im Verhältnis 1:101 (10 μl + 1 ml), Liquor cerebrospinalis im Verhältnis 1:2 (110 μl + 110 μl) oder Synovialflüssigkeit im Verhältnis 1:21 oder 1:41.
2. Kontrollen und verdünnte Proben werden in die Mikrotiterplatten-Vertiefungen pipettiert (jeweils 100 μl).
3. Die Platte wird 30 Minuten bei 37°C inkubiert.
4. Die Vertiefungen werden abgesaugt und 4-mal gewaschen.
5. Konjugat (das Nachweis-Antikörper) wird hinzugefügt (100 μl), gefolgt von einer weiteren Inkubation für 30 Minuten bei 37°C.
6. Die Wells werden 5-mal gewaschen.
7. Substratlösung (TMB-Complete) wird hinzugefügt (100 μl) und für 15 Minuten bei 37°C inkubiert.
8. Stopp-Lösung wird hinzugefügt, und die Farbintensität wird bei 450 nm abgelesen.

Die Ergebnisse werden semiquantitativ unter Verwendung eines Positivitätsindex (IP) ausgewertet, der die Patientenprobe mit dem enthaltenen Cut-off-Kontrollwert vergleicht. Die Kits verfügen über sofort einsatzbereite, farbcodierte Komponenten und abbrechbare Mikrotiterplatten-Streifen, was sie für Labore besonders praktisch macht.

ELISA-Leistung: Was die Zahlen bedeuten

Die diagnostische Leistung dieser Tests ist bemerkenswert hoch. Für Patienten bedeutet dies, dass Sie einem bestätigten Ergebnis vertrauen können. Die wichtigsten Kennwerte sind Sensitivität (die Fähigkeit, Erkrankte korrekt zu identifizieren) und Spezifität (die Fähigkeit, Gesunde korrekt zu identifizieren):

• EIA Borrelia rekombinantes IgG: 98,3 % Sensitivität, 98,1 % Spezifität
• EIA Borrelia rekombinantes IgM: 99,1 % Sensitivität, 97,3 % Spezifität
• EIA Borrelia afzelii VlsE IgG: 98,9 % Sensitivität, 98,9 % Spezifität
• EIA Borrelia afzelii IgM: 95,6 % Sensitivität, 99,0 % Spezifität
• EIA Borrelia b. sensu stricto VlsE IgG: 98,9 % Sensitivität, 98,9 % Spezifität
• EIA Borrelia b. sensu stricto IgM: 97,5 % Sensitivität, 98,9 % Spezifität
• EIA Borrelia garinii VlsE IgG: 98,9 % Sensitivität, 99,0 % Spezifität
• EIA Borrelia garinii IgM: 95,7 % Sensitivität, 98,9 % Spezifität

Diese Kits verwenden rekombinante (genetisch manipulierte) Antigene spezifischer Borrelia-Arten, einschließlich VlsE (Ba, Bg, Bs), p83, p58, p41 (internes Flagellin), p39, OspA, OspB, OspC, OspE, p17 und NapA. Es sind auch Versionen mit Ganzzellantigenen erhältlich, die für jede der wichtigsten Genospezies mit VlsE angereichert sind.

Warum rekombinante Antigene wichtig sind: Die Antikörperantwort-Studie

Forschungsergebnisse zeigen, dass Tests mit rekombinanten Antigenen die Antikörperantwort mit höherer Dynamik nachweisen (das heißt, sie liefern klarere positive Ergebnisse) als Tests mit Ganzzellantigenen. In einer Studie an 86 Patienten mit Lyme-Neuroborreliose war der Positivitätsindex bei rekombinanten Antigene-ELISAs (sowohl IgG als auch IgM) durchweg höher als bei ELISAs mit Ganzzellantigenen. Dies führt zu weniger Grenzwertergebnissen und größerer diagnostischer Sicherheit.

Immunoblotting (Western Blot) erklärt

Der Immunoblot—allgemein bekannt als Western Blot—ist der Bestätigungstest der zweiten Stufe. Er funktioniert, indem spezifische bakterielle Proteine getrennt und auf einem Nitrozellulose-Membranstreifen fixiert werden. Wenn das Blut des Patienten Antikörper gegen diese Proteine enthält, binden sie an den Streifen und erzeugen sichtbare farbige Banden, ähnlich wie ein Barcode. Dies zeigt Ärzten genau, auf welche bakteriellen Proteine das Immunsystem reagiert.

Was Patienten über das Verfahren wissen sollten

1. Proben werden verdünnt: Serum/Plasma im Verhältnis 1:51 (30 μl + 1,5 ml), Liquor cerebrospinalis im Verhältnis 1:2 oder Synovialflüssigkeit im Verhältnis 1:17,5.
2. Die Teststreifen werden 10 Minuten lang in eine Universalösung getaucht.
3. Verdünnte Proben werden hinzugefügt und 30 Minuten lang auf einem Schüttler inkubiert.
4. Die Teststreifen werden dreimal jeweils 5 Minuten gewaschen.
5. Konjugat wird hinzugefügt und 30 Minuten lang inkubiert.
6. Die Teststreifen werden erneut gewaschen, anschließend wird die Substratlösung (BCIP/NBT) für 15 Minuten hinzugefügt.
7. Nach einer abschließenden Wäsche werden die Streifen getrocknet und ausgewertet.

Jeder Teststreifen enthält eine Kontrolllinie, um zu überprüfen, ob der Test ordnungsgemäß funktioniert hat. Die Vorteile des Immunoblot-Verfahrens sind die einfache Auswertung, die hohe Reproduzierbarkeit und die Möglichkeit, Antikörper im Liquor cerebrospinalis nachzuweisen. Die BLOT-LINE-Serie umfasst separate Kits für B. afzelii, B. garinii, B. burgdorferi sensu stricto, kombinierte Borrelia/HGA-Tests sowie eigenständige IgG- und IgM-Tests für Anaplasma.

Leistungsdaten des Immunoblots

• BLOT-LINE Anaplasma IgG: 92,0 % Sensitivität, 94,0 % Spezifität
• BLOT-LINE Anaplasma IgM: 91,4 % Sensitivität, 99,0 % Spezifität
• BLOT-LINE Borrelia/HGA IgG: 96,8 % Sensitivität, 98,5 % Spezifität (für Borrelia); 92,9 % Sensitivität, 96,3 % Spezifität (für Anaplasma)
• BLOT-LINE Borrelia/HGA IgM: 97,1 % Sensitivität, 96,4 % Spezifität (für Borrelia); 94,7 % Sensitivität, 97,1 % Spezifität (für Anaplasma)
• BLOT-LINE Borrelia afzelii IgG: 97,3 % Sensitivität, 96,9 % Spezifität
• BLOT-LINE Borrelia afzelii IgM: 96,6 % Sensitivität, 95,9 % Spezifität
• BLOT-LINE Borrelia garinii IgG: 97,1 % Sensitivität, 96,2 % Spezifität
• BLOT-LINE Borrelia garinii IgM: 95,2 % Sensitivität, 97,0 % Spezifität
• BLOT-LINE Borrelia b. sensu stricto IgG: 96,8 % Sensitivität, 96,9 % Spezifität
• BLOT-LINE Borrelia b. sensu stricto IgM: 96,2 % Sensitivität, 96,8 % Spezifität

Welcher Borrelia-Spezies-Test ist bei Neuroborreliose am besten geeignet?

Eine Studie mit 60 Patienten mit Neuroborreliose verglich die Reaktivität der drei spezies-spezifischen BLOT-LINE-Kits. Der BLOT-LINE Borrelia garinii-Kit zeigte in dieser Patientengruppe eine um mehr als 20 % höhere Reaktivität im Vergleich zu den Kits für B. afzelii und B. burgdorferi sensu stricto, sowohl für IgM als auch für IgG. Dies ist nachvollziehbar, da B. garinii die Spezies ist, die am häufigsten mit neurologischen Symptomen in Verbindung gebracht wird. In einer separaten Studie an 87 Patienten mit Neuroborreliose wurden Antikörper gegen VlsE (ein wichtiger diagnostischer Antigene) in etwa 80 % der Serumproben und 70 % der Liquorproben nachgewiesen. Bei Patienten, bei denen eine Neuroborreliose ausgeschlossen wurde, sowie bei gesunden Kontrollpersonen (n=68) waren diese Raten deutlich niedriger. Wenn Sie neurologische Symptome haben, kann Ihr Arzt speziell den B. garinii-Immunoblot anordnen, aufgrund seiner höheren Sensitivität für diese Form der Erkrankung.

Automatisierter Test mit BlueBLOT-LINE

Für Labore mit hohem Probendurchsatz bietet das BlueDiver-Instrument in Kombination mit BlueBLOT-LINE Borrelia-Kits eine vollständig automatisierte Lösung. Dieses System übernimmt automatisch die Chargen- und Verfallsdatumskontrolle über Barcode-Lesung, Pipettieren, Inkubation und Waschen – wodurch das Risiko menschlicher Fehler verringert wird.

Die gesamte Assay-Zeit beträgt 1 Stunde und 14 Minuten: 30 Minuten Inkubation mit der Probe, 20 Minuten mit dem Konjugat und 10 Minuten mit dem Substrat, dazwischen automatisierte Waschschritte.

Die BlueBLOT-LINE-Streifen enthalten reaktive Kontrolllinien sowie separate Konjugatkontrollen für IgG und IgM, plus eine breite Palette an Antigenen: VlsE (Ba, Bg, Bs), p83, p58, p41, p39, OspB, OspA, OspC, p17, NapA, p44, OmpA, TpN17 und EBV p18. Leistungsdaten zeigen:

• BlueBLOT-LINE Borrelia IgG: 97,4 % Sensitivität, 99,0 % Spezifität (für Borrelia); 83,0 % Sensitivität, 99,0 % Spezifität (für Anaplasma)
• BlueBLOT-LINE Borrelia IgM: 98,3 % Sensitivität, 99,0 % Spezifität (für Borrelia); 92,0 % Sensitivität, 96,0 % Spezifität (für Anaplasma)

Microblot-Array: Fortschrittliche Multiplex-Technologie

Der Microblot-Array repräsentiert die neueste Generation der Bestätigungstests. Spezifische rekombinante Proteine werden als winzige Punkte auf eine Nitrocellulosemembran aufgebracht, die in eine Standard-Mikrotiterplatten-Well passt. Dieses clevere Design bedeutet, dass der Test mit standardmäßiger ELISA-Laborausrüstung verarbeitet werden kann, während gleichzeitig auf mehrere Infektionen getestet wird (Multiplex-Technologie).

Ein wichtiger Vorteil für Patienten ist der geringe Probenverbrauch – es werden nur winzige Mengen an Blut oder Flüssigkeit benötigt. Die Antigene werden in Triplicate aufgetragen, um statistische Schwankungen zu minimieren, und jede Well enthält Referenzpunkte, Testkontrollen, Konjugatkontrollen (separat für IgG und IgM) sowie vier Kalibrierungspunkte zur Sicherstellung der Gültigkeit.

Leistungdaten des Microblot-Array

Dieser Test wurde an menschlichen Serumproben mit folgenden Ergebnissen validiert:

• Borrelia IgG: 98,7 % Sensitivität (n=74), 98,9 % Spezifität (n=100)
• Borrelia IgM: 98,5 % Sensitivität (n=56), 99,9 % Spezifität (n=95)
• Anaplasma IgG: 92,0 % Sensitivität (n=25), 99,9 % Spezifität (n=30)
• Anaplasma IgM: 95,0 % Sensitivität (n=20), 99,9 % Spezifität (n=38)
• Treponema IgG: 98,3 % Sensitivität (n=59), 99,9 % Spezifität (n=30)
• EBV IgM: 99,9 % Sensitivität (n=39), 99,9 % Spezifität (n=51)

Vergleichende Studien zeigten, dass der Microblot-Array mit konventionellen ELISA-Ergebnissen in 92,2 % der Fälle für IgG und 90,7 % für IgM übereinstimmt. Im Vergleich speziell zu rekombinanten Antigene-ELISA- und Western-Blot-Methoden betrug die Übereinstimmung jeweils 92 % bzw. 90 %. Der kleine Prozentsatz an Diskrepanzen (8–10 %) unterstreicht, warum eine klinische Korrelation unerlässlich ist – kein Test ist perfekt, und die ärztliche Beurteilung ist entscheidend.

Neuroborreliose und der Antikörperindex

Bei Patienten mit dem Verdacht auf eine Beteiligung des Nervensystems (Neuroborreliose) ist eine spezielle Berechnung, der Antikörperindex (AI), von entscheidender Bedeutung. Gemäß der internationalen Empfehlung der European Union Concerted Action on Lyme Borreliosis (EUCALB) ist der Nachweis einer intrathekalen Antikörperproduktion für die Diagnose einer frühen und späten Neuroborreliose erforderlich. Einfach ausgedrückt bedeutet dies, dass Ärzte nachweisen müssen, dass Antikörper im Liquor produziert werden, und nicht nur, dass sie im Blut vorhanden sind.

Die Antikörperkonzentration in der Cerebrospinalflüssigkeit (CSF) hängt von drei Faktoren ab:

• Im Blutserum vorhandene Antikörper (die in die CSF übergehen können)
• Die Durchlässigkeit der Blut-Liquor-Schranke
• Die tatsächliche intrathekale (im Liquor) Produktion von Antikörpern

Das Vorhandensein spezifischer Antikörper allein – ob im Serum oder in der CSF – ist kein ausreichender Nachweis für eine Neuroborreliose. Die AI-Berechnung vergleicht das Verhältnis spezifischer Antikörper in der CSF und im Serum unter Berücksichtigung des Zustands der Blut-Liquor-Schranke und der Gesamt-IgG-Werte. Dieser Test kann mit einer kleinen Liquorprobe von etwa 0,15 ml durchgeführt werden, und die spezielle Antikörperindex-Software führt die Berechnungen automatisch durch.

Die Interpretationstabelle ist übersichtlich:

• Serum negativ, CSF positiv: Intrathekale Synthese bestätigt – Positivität verifiziert (EUCALB-Empfehlung).
• Serum positiv, CSF positiv: In der Regel positiv, jedoch ist ein passiver Transfer von Antikörpern durch eine gestörte Blut-Liquor-Schranke möglich – die Bestimmung des AI ist erforderlich.
• Serum positiv, CSF negativ: Möglicherweise positiv, sofern die gemessenen Absorptionswerte in der CSF und im Serum nahe am Grenzwert liegen – die Bestimmung des AI ist erforderlich.
• Serum negativ, CSF negativ: Negativ.

Die Genauigkeit der AI-Berechnungen wird regelmäßig durch die Teilnahme an externen Qualitätskontrollprogrammen überprüft, an denen über 200 Labore teilnehmen, organisiert von der unabhängigen wissenschaftlichen Gesellschaft Instand e.V. Die AI-Ergebnisse von TestLine haben in diesen Programmen konstant gute Leistungen erbracht.

Klinische Implikationen für Patienten

Was bedeutet all diese technische Information für Sie als Patient? Aus den Daten ergeben sich mehrere praktische Konsequenzen:

Erstens ist der Zeitpunkt entscheidend. Wenn Sie von einer Zecke gebissen wurden und Symptome entwickeln, kann eine zu frühe Testung zu einem falsch-negativen Ergebnis führen. Die Sensitivität des ELISA-Tests für die früh lokalisierte Lyme-Borreliose beträgt nur 20–50 %. Wenn Ihr Test negativ ist, die Symptome jedoch anhalten, ist ein Wiederholungstest nach 2–3 Wochen unerlässlich. Ebenso sind Anaplasmose-Antikörper in der akuten Phase nur bei 30–60 % der Patienten nachweisbar, steigen während der Erholungsphase jedoch auf 70–90 %.

Zweitens schützt Sie die zweistufige Teststrategie. Die Kombination aus ELISA-Screening und Bestätigung durch Immunoblot reduziert falsch-positive Ergebnisse erheblich. Tests mit einer Spezifität von über 97 % bedeuten, dass weniger als 3 von 100 gesunden Personen fälschlicherweise als infiziert eingestuft werden – und die Bestätigungsprüfung fängt die meisten dieser Fälle auf.

Drittens ist die Art des Tests wichtig. Tests, die rekombinante Antigene (genetisch hergestellte spezifische Proteine) verwenden, zeigen eine höhere Dynamik der Antikörperantwort als Tests mit Ganzzellantigenen. Das bedeutet, dass sie klarere positiv/negativ-Ergebnisse mit weniger mehrdeutigen Grenzwertbefunden liefern, insbesondere bei Patienten mit Neuroborreliose. Wenn Sie neurologische Symptome haben, kann ein B. garinii-spezifischer Test erheblich aussagekräftiger sein – er zeigte eine um mehr als 20 % höhere Reaktivität bei Neuroborreliose-Patienten im Vergleich zu Tests für andere Borrelia-Arten.

Viertens fügt die CSF-Testung einen Mehrwert bei neurologischen Symptomen hinzu. Wenn Ihr Arzt vermutet, dass die Infektion das Nervensystem erreicht hat, kann die Untersuchung sowohl von Blut als auch von Cerebrospinalflüssigkeit sowie die Berechnung des Antikörperindex zeigen, ob Antikörper im Liquor produziert werden, was für die Diagnose einer Neuroborreliose erforderlich ist.

Einschränkungen und wichtige Hinweise

Kein diagnostischer Test ist perfekt, und es ist wichtig, die Grenzen der serologischen Tests bei durch Zecken übertragenen Erkrankungen zu verstehen:

• Falsch-negative Ergebnisse im frühen Krankheitsstadium: Das Immunsystem benötigt Zeit, um nachweisbare Antikörper zu bilden. Bei einer frühen Lyme-Borreliose kann die Sensitivität so niedrig wie 20–50 % sein.
• Anhaltende Antikörper: IgG- und IgM-Antikörper können mehr als zehn Jahre nach der Infektion noch nachweisbar sein. Ein positives Testergebnis bedeutet nicht zwangsläufig, dass Sie eine aktive Infektion haben, die behandelt werden muss – es könnte auch auf eine zurückliegende Infektion hinweisen.
• Kreuzreaktivität: Antikörper gegen andere Erreger (wie Treponema pallidum, den Erreger der Syphilis, oder EBV) können manchmal zu falsch-positiven Ergebnissen führen. Daher enthalten die Tests spezifische Antigene, um diese Kreuzreaktionen nachzuweisen und auszuschließen.
• Individuelle Unterschiede: Verschiedene Menschen bilden Antikörper mit unterschiedlicher Geschwindigkeit und Intensität. Bei einigen Patienten können Grenzwert-Ergebnisse auftreten, die eine wiederholte Testung erforderlich machen.
• Der Test unterstützt, stellt aber nicht allein die Diagnose: Das klinische Bild – Ihre Symptome, die körperliche Untersuchung und die Expositionsanamnese – bilden stets die Grundlage der Diagnose. Serologische Ergebnisse müssen in diesem Kontext interpretiert werden.
• Schwere Komplikationen bei vulnerablen Patienten: Patienten mit geschwächtem Immunsystem, Transplantatempfänger und Personen ohne Milz haben ein höheres Risiko für schwere Anaplasmosen und sollten nach einem Zeckenbiss umgehend ärztliche Hilfe aufsuchen.

Empfehlungen für Patientinnen und Patienten

Wenn Sie Bedenken bezüglich einer Lyme-Borreliose oder Anaplasmose haben, finden Sie hier praktische, evidenzbasierte Empfehlungen:

1. Suchen Sie zeitnah einen Arzt auf, wenn innerhalb von Wochen nach einem bekannten Zeckenbissen Fieber, Hautausschlag, Kopfschmerzen, Muskelschmerzen oder neurologische Symptome auftreten. Warten Sie nicht ab, bis die Symptome von selbst abklingen.
2. Wissen Sie, dass der klassische Wanderröte-Ausschlag nur bei der Hälfte der Lyme-Borreliose-Patienten auftritt. Das Fehlen eines Ausschlags schließt die Erkrankung nicht aus.
3. Wenn Ihr erster Test negativ ist, die Symptome jedoch anhalten, fragen Sie nach einer wiederholten Testung in 2–3 Wochen. Ein einzelner früher negativer Test ist nicht ausschlaggebend.
4. Fordern Sie den zweistufigen Testansatz: ELISA-Screening mit Bestätigung durch Immunoblot bei positiven oder grenzwertigen Ergebnissen. Dies entspricht dem internationalen Standard der Versorgung.
5. Wenn Sie neurologische Symptome haben (Facialisparese, Taubheitsgefühle, Kribbeln, Gedächtnisprobleme, anhaltende Kopfschmerzen), fragen Sie Ihren Arzt, ob eine Untersuchung der Liquorflüssigkeit mit Berechnung des Antikörperindex angemessen ist.
6. Seien Sie sich des artspezifischen Problems bewusst: Wenn eine Neuroborreliose vermutet wird, kann ein spezifischer Test auf B. garinii sensitiver sein.
7. Geben Sie eine vollständige Anamnese: Teilen Sie Ihrem Arzt alle Zeckenexpositionen, Reisen, Outdoor-Aktivitäten und alle Symptome mit, auch vage Beschwerden. Das klinische Bild ist für die korrekte Interpretation der Testergebnisse unerlässlich.
8. Selbst-diagnostizieren oder selbst behandeln Sie nicht. Entscheidungen über eine Antibiotika-Therapie sollten von einer Fachkraft des Gesundheitswesens auf Basis des vollständigen klinischen Bildes und bestätigter Laborergebnisse getroffen werden.

Häufig gestellte Fragen

Was ist die zweistufige Teststrategie für Lyme-Borreliose und warum wird sie angewendet?

Ärztinnen und Ärzte screenen Ihr Blut zunächst mit einem ELISA-Test. Wenn dieses Ergebnis positiv oder grenzwertig ist, erfolgt ein zweiter Bestätigungstest namens Immunoblot. Dieser zweistufige Ansatz wird von europäischen und amerikanischen Leitlinien empfohlen. Er reduziert falsch-positive Ergebnisse und liefert genauere Resultate, sodass Sie einem bestätigten Ergebnis vertrauen können.

Mein Lyme-Borreliose-Test war negativ, aber ich habe immer noch Symptome. Was sollte ich tun?

Wenn Ihr erster Test negativ ist, die Symptome jedoch anhalten, bitten Sie Ihren Arzt um eine wiederholte Blutuntersuchung in 2 bis 3 Wochen. Es dauert Zeit, bis sich Antikörper bilden, und die Sensitivität in der frühen Phase kann so niedrig wie 20–50 % sein. Ein einzelner negativer Test in der frühen Phase schließt eine Lyme-Borreliose nicht aus.

Warum könnte mein Arzt einen Liquortest (Liquor cerebrospinalis) bei neurologischen Symptomen anordnen?

Wenn Ihr Arzt eine Neuroborreliose vermutet, kann die Untersuchung des Liquors Aufschluss über die Antikörperproduktion im Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit geben. Eine spezielle Berechnung, der sogenannte Antikörperindex (AI), hilft nachzuweisen, ob die Antikörper lokal gebildet werden. Dies kann einen eindeutigen Nachweis einer aktiven Infektion des Nervensystems erbringen, selbst wenn die Bluttests unklar sind.

Was sind die wichtigsten Unterschiede zwischen Lyme-Borreliose und Anaplasmose?

Lyme-Borreliose wird durch Borrelia-Bakterien verursacht und kann Hautausschläge, Gelenkschmerzen und neurologische Probleme verursachen. Anaplasmose wird durch Anaplasma-Bakterien verursacht und beginnt meist innerhalb einer Woche nach einem Zeckenstich mit Fieber. Beide werden von denselben Zecken übertragen und können schwerwiegend sein, wenn sie nicht behandelt werden. Laboruntersuchungen helfen, sie voneinander zu unterscheiden.

Wie genau sind moderne Tests auf Lyme-Borreliose?

Moderne ELISA-Tests haben bei den meisten Lyme-spezifischen Tests eine Sensitivität und Spezifität von über 95 %. Zum Beispiel hat der Borrelia-rekombinante IgG-Test eine Sensitivität von 98,3 % und eine Spezifität von 98,1 %. Immunoblot-Tests zeigen ebenfalls eine hohe Genauigkeit mit einer Sensitivität von etwa 96–98 % für Borrelia. Dennoch kann eine frühe Infektion immer noch übersehen werden, daher ist der Zeitpunkt entscheidend.

Was bedeutet ein positiver Lyme-Borreliose-Test, wenn ich mich vor Jahren infiziert habe?

Antikörper können mehr als zehn Jahre nach der Infektion persistieren. Ein positives Testergebnis bedeutet nicht unbedingt, dass Sie eine aktive Infektion haben, die behandelt werden muss. Ihr Arzt wird das Ergebnis zusammen mit Ihren Symptomen, der körperlichen Untersuchung und der Expositionsanamnese auswerten, um zu entscheiden, ob eine Behandlung erforderlich ist.

Mein Lyme-Borreliose-Test war negativ, aber ich habe immer noch Symptome. Sollte ich eine zweite Meinung einholen?

Ja, eine zweite Meinung kann wertvoll sein, wenn Ihr Lyme-Borreliose-Test negativ ist, die Symptome jedoch anhalten. Tests auf frühe Lyme-Borreliose haben nur eine Sensitivität von 20–50 %, daher schließt ein negatives Ergebnis eine Infektion nicht aus. Eine wiederholte Testung nach 2–3 Wochen ist oft erforderlich. Eine zweite Meinung kann helfen, angemessene Untersuchungen sicherzustellen, wie z. B. die Bestätigung durch Immunoblot oder die Liquoruntersuchung bei neurologischen Symptomen. Diagnostic Detectives Network bietet unabhängige Experten-Zweitmeinungen an.

Quelleninformationen

Original Article Title: INFECTIOUS SEROLOGY – BACTERIOLOGY – BORRELIA | ANAPLASMA

Content Source: This article is based on technical documentation from TestLine Clinical Diagnostics regarding their ELISA, Immunoblot, and Microblot-Array diagnostic kits for Borrelia burgdorferi and Anaplasma phagocytophilum. Data presented include the manufacturer's validation studies, external quality assessment results (Instand e.V., May 2021, over 200 participating laboratories), and a comparative study of 86 patients with Lyme neuroborreliosis and 60 patients in a species-reactivity study (data prepared for publication).

Guideline Reference: The two-level antibody detection strategy is based on: Eldin C, Raffetin A, Bouiller K, et al. Review of European and American guidelines for the diagnosis of Lyme borreliosis. Médecine et Maladies Infectieuses. 2019;49(2):121-132. doi:10.1016/j.medmal.2018.11.011

Note: This patient-friendly article is based on peer-reviewed research and manufacturer validation data. It is provided for educational purposes and does not replace professional medical advice. Always consult a qualified healthcare provider for diagnosis and treatment decisions.