SIEROLOGIA INFETTIVA – BATTERIOLOGIA – BORRELIA | ANAPLASMA

Punti chiave

• La malattia di Lyme e l'anaplasmosi sono infezioni trasmesse dalle zecche con effetti a lungo termine potenzialmente gravi se non trattate tempestivamente.
• Il test a due livelli utilizza lo screening ELISA seguito dalla conferma con immunoblot per ridurre i falsi positivi.
• La sensibilità del test per la malattia di Lyme è solo del 20–50% nell'infezione localizzata precoce, quindi potrebbe essere necessario ripetere il test dopo 2–3 settimane.
• Per la sospetta neuroborreliosi, l'esame del liquido cerebrospinale con il calcolo dell'indice anticorpale può confermare la produzione intratecale di anticorpi.
• I test che utilizzano antigeni ricombinanti offrono una maggiore affidabilità diagnostica, con diversi saggi che mostrano sensibilità e specificità superiori al 95%.

Indice dei contenuti

• Contesto: due malattie trasmesse dalle zecche
• Le fasi della borreliosi di Lyme
• Anaplasmosi granulocitica umana (HGA)
• Come i medici diagnosticano queste infezioni
• Sensibilità del test nelle diverse fasi della malattia
• La scienza alla base dei test: antigeni chiave
• Il test ELISA spiegato
• Il test Immunoblot (Western Blot) spiegato
• Test automatizzato con BlueBLOT-LINE
• Microblot-Array: tecnologia multiplex avanzata
• Neuroborreliosi e indice anticorpale
• Implicazioni cliniche per i pazienti
• Limitazioni e considerazioni importanti
• Raccomandazioni per i pazienti
• Informazioni sulla fonte

Contesto: due malattie trasmesse dalle zecche

La borreliosi di Lyme (comunemente chiamata malattia di Lyme) è una malattia infettiva multisistemica causata da batteri a forma di spirale chiamati Borrelia burgdorferi (un tipo di spirocheta). L'infezione viene trasmessa all'uomo attraverso la puntura di zecche appartenenti al genere Ixodes, le stesse zecche dei cervi comuni in molte parti del mondo.

La malattia di Lyme è caratterizzata da sintomi clinici sia precoci che tardivi che possono colpire praticamente qualsiasi sistema del corpo. L'anaplasmosi granulocitica umana (HGA) è una malattia distinta causata da un batterio diverso chiamato Anaplasma phagocytophilum. In molte regioni, la zecca dei boschi, Ixodes ricinus, funge da vettore per entrambe le malattie. Mentre la zecca succhia il sangue, i batteri entrano nel sistema cardiovascolare dell'ospite, dove attaccano le cellule del sangue.

Queste infezioni sono importanti per i pazienti perché spesso non vengono riconosciute o vengono diagnosticate erroneamente. I sintomi possono imitare molte altre condizioni e i test anticorpali non sono sempre semplici. Capire come funzionano i test può aiutarLe a porre le domande giuste se Lei o una persona cara siete in valutazione per una malattia trasmessa dalle zecche.

Le fasi della borreliosi di Lyme

La malattia di Lyme progredisce attraverso tre fasi distinte, ciascuna con il proprio insieme di sintomi e sfide diagnostiche.

Infezione localizzata precoce (da giorni a settimane)

Questa prima fase è caratterizzata dall'eritema migrante (EM), la classica eruzione cutanea "a occhio di bue". È importante notare che questa eruzione cutanea compare solo nel 50% dei pazienti. I sintomi precoci possono includere anche sintomi "simil-influenzali", mal di testa e linfonodi ingrossati (linfoadenite). Ciò significa che la metà di tutti i pazienti infetti potrebbe non presentare la caratteristica eruzione cutanea che la maggior parte delle persone associa alla malattia di Lyme.

Infezione disseminata precoce (da settimane a mesi)

Durante questa fase, i batteri Borrelia si diffondono attraverso i vasi sanguigni e il sistema linfatico per raggiungere il sistema nervoso centrale (SNC), le articolazioni, il cuore, gli occhi, la pelle e altri organi. I sintomi diagnosticati più frequentemente in questa fase includono:

• Neuroborreliosi—infezione del sistema nervoso
• Paresi facciale—paralisi del nervo facciale (paralisi di Bell)
• Linfocitoma borreliale—gonfiori rosso-bluastri, spesso sui lobi delle orecchie o sulle nocche
• Sindrome di Bannwarth—una combinazione di dolore nervoso, meningite e paralisi facciale

Ulteriori sintomi possono includere alterazioni cutanee (in circa il 20% dei casi) e sintomi non specifici che assomigliano a molte altre malattie: ghiandole gonfie, mal di testa, dolori muscolari, nausea, vomito, problemi addominali e frequenti paresi (debolezza muscolare o paralisi parziale).

Infezione disseminata tardiva (da mesi ad anni)

Senza un trattamento efficace, la malattia può progredire verso una fase tardiva che dura mesi o addirittura anni. Le alterazioni immuno-correlate più tipiche diagnosticate in questa fase sono:

• Acrodermatite cronica atrofica (ACA)—lesioni cutanee croniche che possono causare assottigliamento e discromia della pelle
• Neuroborreliosi cronica—coinvolgimento persistente del sistema nervoso
• Artrite borreliale—infiammazione delle articolazioni, spesso delle ginocchia

Studi approfonditi hanno dimostrato che diverse genospecie (sottotipi) di Borrelia sono associate a diverse presentazioni cliniche. B. garinii è associata a sintomi neurologici, B. afzelii a disturbi cutanei cronici (soprattutto ACA) e B. burgdorferi sensu stricto è principalmente correlata a lesioni articolari. Tutte le genospecie possono, tuttavia, causare eritema migrante e molte altre manifestazioni cliniche.

Anaplasmosi granulocitica umana (HGA)

L'anaplasmosi è una malattia acuta che si sviluppa tipicamente entro una settimana dopo una puntura di zecca. I sintomi possono variare da forme completamente asintomatiche a condizioni gravi e potenzialmente letali che coinvolgono sintomi respiratori, gastrointestinali, renali e neurologici.

Il primo e più comune segno è uno stato febbrile della durata di almeno 3-7 giorni dopo una puntura di zecca. Le complicanze gravi sono più probabili nei pazienti con sistema immunitario indebolito (immunodeficit), negli individui che hanno subito un trapianto e nei pazienti senza milza. La malattia è generalmente acuta; tuttavia, i casi più complicati che non vengono trattati in tempo possono diventare cronici e potrebbero persino essere pericolosi per la vita.

Un dato epidemiologico degno di nota è che gli uomini hanno una probabilità quattro volte maggiore rispetto alle donne (4:1) di ammalarsi di anaplasmosi.

Diagnosticare l'HGA basandosi solo sui sintomi clinici è molto difficile, motivo per cui i risultati di laboratorio sono essenziali. I reperti di laboratorio caratteristici includono:

• Leucopenia—basso numero di globuli bianchi
• Trombocitopenia—bassa conta piastrinica
• Transaminasi epatiche elevate—segni di coinvolgimento epatico negli esami del sangue

La produzione di anticorpi inizia entro le prime 2 settimane dall'esordio della malattia. Tuttavia, solo il 30–60% dei pazienti risulta positivo (sieropositivo) durante la fase acuta. Questo numero sale al 70–90% durante la convalescenza (il periodo di recupero), il che ha importanti implicazioni su quando dovrebbero essere eseguiti i test.

Come i medici diagnosticano queste infezioni

La diagnosi della malattia di Lyme e dell'anaplasmosi si basa su tre elementi: l'anamnesi del paziente, il quadro clinico (sintomi e reperti obiettivi) e i risultati degli esami di laboratorio. Attualmente, i metodi diagnostici di scelta sono lo screening per anticorpi IgG e IgM specifici mediante test ELISA, seguito dalla conferma degli anticorpi verso antigeni specifici mediante immunoblot. La coltivazione diretta dei batteri o la microscopia elettronica non sono pratiche per l'uso di routine.

La diagnosi sierologica della borreliosi è impegnativa per diversi motivi:

• L'ampia diversità genetica della specie Borrelia burgdorferi sensu lato
• Possibile reattività crociata con antigeni non correlati di altri microrganismi
• La ricchezza di Borrelia in proteine da shock termico, che possono innescare risposte immunitarie non specifiche
• Reattività sierologica individuale altamente variabile
• Produzione di anticorpi estremamente lenta nella fase iniziale della malattia
• Gli anticorpi IgG e IgM possono persistere per più di dieci anni, rendendo difficile distinguere un'infezione passata da una attiva

L'approccio di test a due livelli

Per massimizzare l'accuratezza, i medici utilizzano una strategia di rilevamento degli anticorpi a due livelli. Questo approccio è approvato dalle linee guida europee e americane (come riassunto da Eldin et al., 2019).

1. Livello 1 (Screening): I campioni vengono testati con il metodo ELISA, che divide i pazienti in gruppi positivi o negativi in base al loro stato anticorpale.
2. Livello 2 (Conferma): I risultati positivi e borderline vengono confermati mediante immunoblot, che rileva gli anticorpi contro specifici antigeni di Borrelia.

Se il primo test è negativo ma i sintomi del paziente persistono, un secondo campione di sangue (di controllo) deve essere raccolto 2–3 settimane dopo e nuovamente testato. Questo è importante perché i livelli di anticorpi possono non essere rilevabili nelle primissime fasi dell'infezione.

Il numero di discordanze tra i risultati dell'immunoblot (livello 2) e dell'ELISA (livello 1) si riduce quando il metodo ELISA si basa su antigeni ricombinanti, come nel caso dei saggi TestLine descritti in questo articolo.

Il risultato di un test da solo non costituisce la diagnosi: la supporta. La diagnosi finale si basa sul quadro clinico completo del paziente, non solo sul risultato sierologico.

Sensibilità del test nelle diverse fasi della malattia

Uno dei fatti più importanti da comprendere per i pazienti è che la sensibilità di questi test, ovvero la loro capacità di rilevare la malattia quando è presente, varia notevolmente a seconda dello stadio della malattia. Secondo gli standard di qualità tedeschi MiQ, la sensibilità diagnostica per le diverse forme di borreliosi di Lyme è:

• Infezione precoce localizzata (eritema migrante, linfocitoma borreliale, EM multiplo): 20–50%
• Infezione precoce disseminata (neuroborreliosi, artrite di Lyme, cardite): 70–90%
• Infezione tardiva disseminata (acrodermatite cronica atrofica, neuroborreliosi tardiva): 90–100%

In altre parole, un risultato negativo del test all'inizio della malattia non esclude la malattia di Lyme. Per questo motivo è così importante ripetere il test dopo 2–3 settimane quando i sintomi persistono.

La scienza alla base dei test: antigeni chiave

I moderni test diagnostici non cercano un anticorpo qualsiasi, ma cercano anticorpi contro proteine specifiche (antigeni) del batterio. Ogni antigene compare in momenti diversi durante l'infezione ed è associato a diverse manifestazioni cliniche. Ecco gli antigeni chiave di Borrelia utilizzati in questi test:

• VlsE (Ba, Bg, Bs): l'antigene principale della risposta anticorpale precoce e tardiva. Aumenta significativamente la sensibilità del test; circa il 90% dei sieri e dei campioni di liquido cerebrospinale positivi reagisce a questa banda antigenica.
• p83: la principale proteina extracellulare, un antigene della risposta anticorpale tardiva altamente tipico della neuroborreliosi.
• p58 (OppA-2): un trasportatore di membrana considerato un marcatore dello stadio disseminato della malattia di Lyme.
• p41 (Ba, Bs)—la parte interna della flagellina, un antigene altamente specifico della risposta anticorpale precoce.
• p39 (BmpA)—un recettore glicosaminopeptidico e un antigene della risposta tardiva. È significativo per la malattia di Lyme disseminata in fase avanzata ed è spesso associato all'artrite di Lyme.
• OspA (Ba, Bg, Bs)—proteina di superficie esterna A, un antigene della risposta tardiva tipico della neuroborreliosi.
• OspB—proteina di superficie esterna B, un antigene della risposta tardiva.
• OspC (Ba, Bg, Bs, Bsp)—proteina di superficie esterna C, il marcatore immunodominante della risposta anticorpale IgM (i primi anticorpi prodotti).
• OspE—proteina di superficie esterna E.
• NapA—proteina attivante i neutrofili A, un forte immunogeno e un marcatore principale della patogenesi dell'artrite di Lyme.
• p17 (DbpA)—proteina legante la decorina A, coinvolta sia nella risposta anticorpale precoce che in quella tardiva e tipica della neuroborreliosi.

Le lettere Ba, Bg, Bs e Bsp si riferiscono alla sottospecie batterica specifica da cui proviene l'antigene: B. afzelii, B. garinii, B. burgdorferi sensu stricto e B. spielmanii.

Antigeni di Anaplasma e a Reattività Crociata

Per l'anaplasmosi, gli antigeni chiave sono p44 (l'antigene principale della risposta anticorpale all'anaplasmosi granulocitica umana), OmpA (una proteina di membrana esterna e un marcatore di virulenza significativo) e Asp62 (una proteina di superficie trasportatrice di membrana).

I test includono anche antigeni per rilevare reazioni crociate con altre infezioni: TpN17, una proteina di membrana altamente specifica di Treponema pallidum (il batterio che causa la sifilide), e VCA-p18, un antigene del capside virale che rileva l'infezione da EBV (virus di Epstein-Barr). L'inclusione di questi antigeni aiuta a prevenire risultati falsi positivi causati da anticorpi contro infezioni non correlate.

Il Test ELISA Spiegato

L'ELISA (saggio immunoenzimatico) è il test di screening di primo livello. I saggi EIA TestLine si basano su un metodo ELISA di tipo sandwich. Sono progettati per la rilevazione di anticorpi IgG e IgM nel siero umano, nel plasma, nel liquido cerebrospinale o nel liquido sinoviale (articolare).

Panoramica del Protocollo a Misura di Paziente

Il processo di analisi è semplice e richiede circa 1,5 ore in totale:

1. I campioni vengono diluiti: siero/plasma a 1:101 (10 μl + 1 ml), liquido cerebrospinale a 1:2 (110 μl + 110 μl) o liquido sinoviale a 1:21 o 1:41.
2. I controlli e i campioni diluiti vengono pipettati nei pozzetti della micropiastra (100 μl ciascuno).
3. La piastra viene incubata per 30 minuti a 37°C.
4. I pozzetti vengono aspirati e lavati 4 volte.
5. Si aggiunge il coniugato (l'anticorpo di rilevamento) (100 μl), seguito da un'altra incubazione di 30 minuti a 37°C.
6. I pozzetti vengono lavati 5 volte.
7. Si aggiunge la soluzione di substrato (TMB-Complete) (100 μl) e si incuba per 15 minuti a 37°C.
8. Si aggiunge la soluzione bloccante e si legge l'intensità del colore a 450 nm.

I risultati vengono valutati semiquantitativamente utilizzando un indice di positività (IP), che confronta il campione del paziente con il controllo cut-off incluso. I kit sono forniti con componenti pronti all'uso, codificati a colori e strisce di micropiastra separabili, il che li rende convenienti per i laboratori.

Prestazioni del test ELISA: cosa significano i numeri

La performance diagnostica di questi test è straordinariamente elevata. Per i pazienti, questo significa che si può fidare di un risultato confermato. Le metriche chiave sono la sensibilità (la capacità di identificare correttamente coloro che hanno la malattia) e la specificità (la capacità di identificare correttamente coloro che non hanno la malattia):

• EIA Borrelia recombinant IgG: sensibilità 98,3%, specificità 98,1%
• EIA Borrelia recombinant IgM: sensibilità 99,1%, specificità 97,3%
• EIA Borrelia afzelii VlsE IgG: sensibilità 98,9%, specificità 98,9%
• EIA Borrelia afzelii IgM: sensibilità 95,6%, specificità 99,0%
• EIA Borrelia b. sensu stricto VlsE IgG: sensibilità 98,9%, specificità 98,9%
• EIA Borrelia b. sensu stricto IgM: sensibilità 97,5%, specificità 98,9%
• EIA Borrelia garinii VlsE IgG: sensibilità 98,9%, specificità 99,0%
• EIA Borrelia garinii IgM: sensibilità 95,7%, specificità 98,9%

Questi kit utilizzano antigeni ricombinanti (ingegnerizzati geneticamente) da specie specifiche di Borrelia, tra cui VlsE (Ba, Bg, Bs), p83, p58, p41 (flagellina interna), p39, OspA, OspB, OspC, OspE, p17 e NapA. Sono disponibili anche versioni con antigeni a cellula intera, arricchite con VlsE, per ogni genospecie principale.

Perché gli antigeni ricombinanti sono importanti: lo studio sulla risposta anticorpale

La ricerca mostra che i test con antigeni ricombinanti rilevano la risposta anticorpale con una dinamica più elevata (il che significa che mostrano risultati positivi più chiari) rispetto ai test con antigeni a cellula intera. In uno studio su 86 pazienti con neuroborreliosi di Lyme, l'indice di positività è stato costantemente più alto con i test ELISA ad antigeni ricombinanti (sia IgG che IgM) rispetto ai test ELISA ad antigeni a cellula intera. Questo si traduce in un minor numero di risultati borderline e in una maggiore sicurezza diagnostica.

Il test Immunoblot (Western Blot) spiegato

L'immunoblot, comunemente noto come Western blot, è il test di conferma di secondo livello. Funziona separando specifiche proteine batteriche e fissandole su una striscia di membrana di nitrocellulosa. Se il sangue del paziente contiene anticorpi contro queste proteine, questi si legano alla striscia e producono bande colorate visibili, un po' come un codice a barre. Questo indica ai medici esattamente a quali proteine batteriche sta reagendo il sistema immunitario.

Cosa deve sapere il paziente sulla procedura

1. I campioni vengono diluiti: siero/plasma a 1:51 (30 μl + 1,5 ml), liquido cerebrospinale a 1:2 o liquido sinoviale a 1:17,5.
2. Le strisce vengono immerse in una soluzione universale per 10 minuti.
3. I campioni diluiti vengono aggiunti e incubati per 30 minuti su un agitatore.
4. Le strisce vengono lavate 3 volte per 5 minuti.
5. Il coniugato viene aggiunto e incubato per 30 minuti.
6. Le strisce vengono lavate nuovamente, quindi viene aggiunta la soluzione di substrato (BCIP/NBT) per 15 minuti.
7. Dopo un lavaggio finale, le strisce vengono asciugate e valutate.

Ogni striscia include una linea di controllo per verificare che il test abbia funzionato correttamente. I vantaggi del test immunoblot includono una facile interpretazione, un'elevata riproducibilità e la capacità di rilevare anticorpi nel liquido cerebrospinale. La serie BLOT-LINE include kit separati per B. afzelii, B. garinii, B. burgdorferi sensu stricto, Borrelia/HGA combinati e test autonomi per IgG e IgM anti-Anaplasma.

Dati di performance dell'immunoblot

• BLOT-LINE Anaplasma IgG: sensibilità del 92,0%, specificità del 94,0%
• BLOT-LINE Anaplasma IgM: sensibilità del 91,4%, specificità del 99,0%
• BLOT-LINE Borrelia/HGA IgG: sensibilità del 96,8%, specificità del 98,5% (per Borrelia); sensibilità del 92,9%, specificità del 96,3% (per Anaplasma)
• BLOT-LINE Borrelia/HGA IgM: sensibilità del 97,1%, specificità del 96,4% (per Borrelia); sensibilità del 94,7%, specificità del 97,1% (per Anaplasma)
• BLOT-LINE Borrelia afzelii IgG: sensibilità del 97,3%, specificità del 96,9%
• BLOT-LINE Borrelia afzelii IgM: sensibilità del 96,6%, specificità del 95,9%
• BLOT-LINE Borrelia garinii IgG: sensibilità del 97,1%, specificità del 96,2%
• BLOT-LINE Borrelia garinii IgM: sensibilità del 95,2%, specificità del 97,0%
• BLOT-LINE Borrelia b. sensu stricto IgG: sensibilità del 96,8%, specificità del 96,9%
• BLOT-LINE Borrelia b. sensu stricto IgM: sensibilità del 96,2%, specificità del 96,8%

Quale test per le specie di Borrelia è migliore per la neuroborreliosi?

Uno studio su 60 pazienti con neuroborreliosi ha confrontato la reattività dei tre kit BLOT-LINE specie-specifici. Il kit BLOT-LINE Borrelia garinii ha mostrato una reattività superiore di oltre il 20% in questo gruppo di pazienti rispetto ai kit per B. afzelii e B. burgdorferi sensu stricto, sia per le IgM che per le IgG. Ciò è logico, poiché B. garinii è la specie più comunemente associata ai sintomi neurologici. In uno studio separato su 87 pazienti con neuroborreliosi, gli anticorpi contro VlsE (un antigene diagnostico chiave) sono stati rilevati in circa l'80% dei campioni di siero e nel 70% dei campioni di liquido cerebrospinale. Nei pazienti in cui la neuroborreliosi era stata esclusa e nei controlli sani (n=68), questi tassi erano sostanzialmente inferiori. Se presenta sintomi neurologici, il medico potrebbe richiedere specificamente l'immunoblot per B. garinii a causa della sua maggiore sensibilità per questa forma della malattia.

Test automatizzato con BlueBLOT-LINE

Per i laboratori ad alto volume, lo strumento BlueDiver combinato con i kit BlueBLOT-LINE Borrelia offre una soluzione completamente automatizzata. Questo sistema gestisce automaticamente il controllo dei lotti e delle scadenze tramite lettura di codici a barre, pipettaggio, incubazione e lavaggio, riducendo il rischio di errore umano.

Il tempo totale del test è di 1 ora e 14 minuti: incubazione con il campione per 30 minuti, 20 minuti con il coniugato e 10 minuti con il substrato, con fasi di lavaggio automatizzate intermedie.

Le strisce BlueBLOT-LINE includono linee di controllo reattive e controlli del coniugato separati per IgG e IgM, oltre a un'ampia gamma di antigeni: VlsE (Ba, Bg, Bs), p83, p58, p41, p39, OspB, OspA, OspC, p17, NapA, p44, OmpA, TpN17 e EBV p18. I dati sulle prestazioni mostrano:

• BlueBLOT-LINE Borrelia IgG: sensibilità 97,4%, specificità 99,0% (per Borrelia); sensibilità 83,0%, specificità 99,0% (per Anaplasma)
• BlueBLOT-LINE Borrelia IgM: sensibilità 98,3%, specificità 99,0% (per Borrelia); sensibilità 92,0%, specificità 96,0% (per Anaplasma)

Microblot-Array: tecnologia multiplex avanzata

Il Microblot-Array rappresenta la generazione più recente di test di conferma. Proteine ricombinanti specifiche vengono applicate come minuscoli spot su una membrana di nitrocellulosa che si inserisce in un pozzetto standard di una piastra per microtitolazione. Questo design intelligente consente di processare il test utilizzando la strumentazione ELISA standard di laboratorio, testando contemporaneamente più infezioni (tecnologia multiplex).

Un vantaggio chiave per il paziente è il basso consumo di campione: sono necessarie solo quantità minime di sangue o di liquido. Gli antigeni vengono depositati in triplicato per ridurre al minimo la variazione statistica e ogni pozzetto include spot di riferimento, controlli del test, controlli del coniugato (separati per IgG e IgM) e quattro spot di calibrazione per garantire la validità.

Dati sulle prestazioni del Microblot-Array

Questo test è stato validato su campioni di siero umano con i seguenti risultati:

• Borrelia IgG: sensibilità 98,7% (n=74), specificità 98,9% (n=100)
• Borrelia IgM: sensibilità 98,5% (n=56), specificità 99,9% (n=95)
• Anaplasma IgG: sensibilità 92,0% (n=25), specificità 99,9% (n=30)
• Anaplasma IgM: sensibilità 95,0% (n=20), specificità 99,9% (n=38)
• Treponema IgG: sensibilità 98,3% (n=59), specificità 99,9% (n=30)
• EBV IgM: sensibilità 99,9% (n=39), specificità 99,9% (n=51)

Gli studi comparativi hanno mostrato che il Microblot-Array concorda con i risultati ELISA convenzionali nel 92,2% dei casi per le IgG e nel 90,7% per le IgM. Rispetto specificamente ai metodi ELISA con antigeni ricombinanti e Western blot, la concordanza è stata rispettivamente del 92% e del 90%. La piccola percentuale di discordanze (8–10%) evidenzia perché la correlazione clinica sia essenziale: nessun test è perfetto e il giudizio del medico è importante.

Neuroborreliosi e indice anticorpale

Per i pazienti con sospetto coinvolgimento del sistema nervoso (neuroborreliosi), un calcolo speciale chiamato indice anticorpale (AI) è cruciale. Secondo la raccomandazione internazionale della European Union Concerted Action on Lyme Borreliosis (EUCALB), la prova della sintesi intratecale di anticorpi è necessaria per la diagnosi di neuroborreliosi precoce e tardiva. In parole povere, questo significa che i medici devono dimostrare che gli anticorpi vengono prodotti all'interno del liquido spinale, non solo che sono presenti nel sangue.

Il livello di anticorpi nel liquido cerebrospinale (LCS) dipende da tre fattori:

• Anticorpi presenti nel siero del sangue (che possono passare nel LCS)
• La permeabilità della barriera emato-liquorale
• La produzione intratecale effettiva (all'interno del liquido spinale) di anticorpi

La sola presenza di anticorpi specifici, sia nel siero che nel LCS, non è una prova sufficiente di neuroborreliosi. Il calcolo dell'AI confronta il rapporto degli anticorpi specifici nel LCS e nel siero rispetto allo stato della barriera emato-liquorale e ai livelli totali di immunoglobuline. Questo test può essere eseguito con un piccolo campione di LCS di circa 0,15 ml, e un software dedicato all'indice anticorpale gestisce i calcoli automaticamente.

La tabella di interpretazione è semplice:

• Siero negativo, LCS positivo: Sintesi intratecale confermata—positività verificata (raccomandazione EUCALB).
• Siero positivo, LCS positivo: Solitamente positivo, ma è possibile il trasferimento passivo di anticorpi attraverso una barriera emato-liquorale alterata—è necessaria la determinazione dell'AI.
• Siero positivo, LCS negativo: Possibilmente positivo, a condizione che i valori di assorbanza misurati nel LCS e nel siero siano vicini al controllo cut-off—è necessaria la determinazione dell'AI.
• Siero negativo, LCS negativo: Negativo.

L'accuratezza dei calcoli dell'AI è verificata regolarmente attraverso la partecipazione a programmi esterni di valutazione della qualità che coinvolgono oltre 200 laboratori, organizzati dalla società scientifica indipendente Instand e.V. I risultati dell'AI di TestLine hanno costantemente ottenuto buone prestazioni in questi programmi.

Implicazioni cliniche per i pazienti

Cosa significano tutte queste informazioni tecniche per Lei come paziente? Dai dati derivano diverse implicazioni pratiche:

Primo, il momento del test è importante. Se è stato morso da una zecca e sviluppa sintomi, eseguire il test troppo presto può produrre un falso negativo. La sensibilità del test ELISA per la malattia di Lyme localizzata precoce è solo del 20–50%. Se il test è negativo ma i sintomi persistono, è essenziale ripetere il test dopo 2–3 settimane. Allo stesso modo, gli anticorpi per l'anaplasmosi sono rilevabili solo nel 30–60% dei pazienti durante la fase acuta, salendo al 70–90% durante la convalescenza.

Secondo, la strategia di test a due livelli La protegge. La combinazione dello screening ELISA seguito dalla conferma con immunoblot riduce drasticamente i falsi positivi. Test con specificità superiore al 97% significano che meno di 3 persone sane su 100 saranno identificate erroneamente come infette—e il test di conferma individua la maggior parte di questi casi.

Terzo, il tipo di test è importante. I test che utilizzano antigeni ricombinanti (proteine specifiche geneticamente modificate) mostrano una dinamica più elevata della risposta anticorpale rispetto ai test con antigeni a cellula intera. Ciò significa che producono risultati positivi/negativi più chiari con meno letture ambigue al limite, specialmente nei pazienti con neuroborreliosi. Se ha sintomi neurologici, un test specifico per B. garinii può essere significativamente più informativo—ha mostrato una reattività superiore di oltre il 20% nei pazienti con neuroborreliosi rispetto ai test per altre specie di Borrelia.

Quarto, il test del LCS aggiunge valore per i sintomi neurologici. Se il medico sospetta che l'infezione abbia raggiunto il sistema nervoso, analizzare sia il sangue che il liquido cerebrospinale e calcolare l'indice anticorpale può mostrare se gli anticorpi vengono prodotti all'interno del liquido spinale, il che è necessario per la diagnosi di neuroborreliosi.

Limitazioni e considerazioni importanti

Nessun test diagnostico è perfetto ed è importante comprendere i limiti dei test sierologici per le malattie trasmesse dalle zecche:

• Falsi negativi nelle fasi iniziali della malattia: Il sistema immunitario impiega tempo per produrre anticorpi rilevabili. Nella malattia di Lyme in fase iniziale, la sensibilità può essere bassa, tra il 20 e il 50%.
• Persistenza degli anticorpi: Gli anticorpi IgG e IgM possono persistere per più di dieci anni dopo l'infezione. Un test positivo non significa necessariamente che Lei abbia un'infezione attiva che richiede trattamento: potrebbe riflettere un'infezione passata.
• Reattività crociata: Gli anticorpi contro altri organismi (come Treponema pallidum, il batterio della sifilide, o il virus di Epstein-Barr) possono talvolta causare falsi positivi. Per questo i test includono antigeni specifici per rilevare ed escludere queste reazioni crociate.
• Variazione individuale: Persone diverse producono anticorpi con velocità e intensità differenti. Alcuni pazienti possono avere risultati al limite che richiedono la ripetizione del test.
• Il test supporta, ma non stabilisce, la diagnosi: Il quadro clinico, ovvero i Suoi sintomi, l'esame obiettivo e l'anamnesi di esposizione, è sempre il fondamento della diagnosi. I risultati sierologici devono essere interpretati in questo contesto.
• Complicanze gravi nei pazienti vulnerabili: I pazienti con sistema immunitario indebolito, i trapiantati e coloro che non hanno la milza sono a maggior rischio di anaplasmosi grave e devono rivolgersi prontamente a un medico dopo una puntura di zecca.

Raccomandazioni per i pazienti

Se è preoccupato per la malattia di Lyme o l'anaplasmosi, ecco raccomandazioni pratiche e basate sull'evidenza:

1. Si rivolga prontamente a un medico se sviluppa febbre, eruzione cutanea, mal di testa, dolori muscolari o sintomi neurologici entro settimane da una nota puntura di zecca. Non aspetti che i sintomi si risolvano da soli.
2. Sappia che la classica eruzione a occhio di bue compare solo nella metà dei pazienti con malattia di Lyme. L'assenza di eruzione cutanea non esclude la malattia.
3. Se il primo test è negativo ma i sintomi persistono, chieda di ripetere il test dopo 2-3 settimane. Un singolo test negativo precoce non è definitivo.
4. Richieda l'approccio di test a due livelli: screening ELISA con conferma mediante immunoblot per risultati positivi o al limite. Questo è lo standard di cura internazionale.
5. Se ha sintomi neurologici (paresi facciale, intorpidimento, formicolio, problemi di memoria, mal di testa persistente), chieda al Suo medico se è appropriato un esame del liquido cerebrospinale con calcolo dell'indice anticorpale.
6. Sia consapevole del problema specie-specifico: Se si sospetta una neuroborreliosi, un test specifico per B. garinii può essere più sensibile.
7. Fornisca un'anamnesi completa: Informi il Suo medico di qualsiasi esposizione a zecche, viaggi, attività all'aperto e di tutti i sintomi, anche quelli vaghi. Il quadro clinico è essenziale per una corretta interpretazione dei risultati dei test.
8. Non si autodiagnostichi e non si autocurri. Le decisioni sul trattamento antibiotico devono essere prese da un professionista sanitario sulla base del quadro clinico completo e dei risultati di laboratorio confermati.

Domande frequenti

Qual è la strategia di test a due livelli per la malattia di Lyme e perché viene utilizzata?

I medici esaminano prima il Suo sangue con un test ELISA. Se il risultato è positivo o al limite, viene eseguito un secondo test di conferma chiamato immunoblot. Questo approccio a due livelli è raccomandato dalle linee guida europee e americane. Riduce i falsi positivi e fornisce risultati più accurati, così Lei può fidarsi di un risultato confermato.

Il mio test per la malattia di Lyme è risultato negativo, ma ho ancora sintomi. Cosa dovrei fare?

Se il primo test è negativo ma i sintomi persistono, chieda al medico di ripetere l'esame del sangue tra 2 o 3 settimane. Gli anticorpi impiegano tempo per svilupparsi e la sensibilità precoce può essere bassa, tra il 20 e il 50%. Un singolo test negativo precoce non esclude la malattia di Lyme.

Perché il medico potrebbe prescrivere un esame del liquido cerebrospinale (LCS) per sintomi neurologici?

Se il medico sospetta una neuroborreliosi, l'analisi del LCS può verificare la produzione di anticorpi all'interno del liquido spinale. Un calcolo speciale chiamato indice anticorpale (AI) aiuta a dimostrare se gli anticorpi sono prodotti localmente. Questo può fornire una prova definitiva di un'infezione attiva del sistema nervoso, anche se gli esami del sangue non sono chiari.

Quali sono le differenze principali tra la malattia di Lyme e l'anaplasmosi?

La malattia di Lyme è causata dal batterio Borrelia e può causare eruzioni cutanee, dolori articolari e problemi neurologici. L'anaplasmosi è causata dal batterio Anaplasma e di solito inizia con febbre entro una settimana dal morso di zecca. Entrambe sono trasmesse dalle stesse zecche e possono essere gravi se non trattate. Gli esami di laboratorio aiutano a distinguerle.

Quanto sono accurati i test moderni per la malattia di Lyme?

I moderni test ELISA hanno una sensibilità e una specificità superiori al 95% per la maggior parte dei test specifici per la Lyme. Ad esempio, il test IgG ricombinante per Borrelia ha una sensibilità del 98,3% e una specificità del 98,1%. Anche i test immunoblot mostrano un'elevata accuratezza, con una sensibilità di circa il 96-98% per Borrelia. Tuttavia, un'infezione precoce può ancora non essere rilevata, quindi il momento del test è importante.

Cosa significa un test positivo per la malattia di Lyme se sono stato infettato anni fa?

Gli anticorpi possono persistere per più di dieci anni dopo l'infezione. Un test positivo non significa necessariamente che Lei abbia un'infezione attiva che richiede un trattamento. Il medico interpreterà il risultato insieme ai sintomi, all'esame obiettivo e alla storia di esposizione per decidere se è necessario un trattamento.

Il mio test per la malattia di Lyme è risultato negativo ma ho ancora sintomi. Dovrei chiedere un secondo parere?

Sì, un secondo parere può essere prezioso se il test per la malattia di Lyme è negativo ma i sintomi persistono. I test precoci per la malattia di Lyme hanno una sensibilità solo del 20-50%, quindi un risultato negativo non esclude l'infezione. Spesso è necessario ripetere il test dopo 2-3 settimane. Un secondo parere può aiutare a garantire test appropriati, come la conferma con immunoblot o l'analisi del liquido cerebrospinale per i sintomi neurologici. Diagnostic Detectives Network fornisce secondi pareri indipendenti da esperti.

Fonte delle informazioni

Original Article Title: INFECTIOUS SEROLOGY – BACTERIOLOGY – BORRELIA | ANAPLASMA

Content Source: This article is based on technical documentation from TestLine Clinical Diagnostics regarding their ELISA, Immunoblot, and Microblot-Array diagnostic kits for Borrelia burgdorferi and Anaplasma phagocytophilum. Data presented include the manufacturer's validation studies, external quality assessment results (Instand e.V., May 2021, over 200 participating laboratories), and a comparative study of 86 patients with Lyme neuroborreliosis and 60 patients in a species-reactivity study (data prepared for publication).

Guideline Reference: The two-level antibody detection strategy is based on: Eldin C, Raffetin A, Bouiller K, et al. Review of European and American guidelines for the diagnosis of Lyme borreliosis. Médecine et Maladies Infectieuses. 2019;49(2):121-132. doi:10.1016/j.medmal.2018.11.011

Nota: Questo articolo divulgativo per i pazienti si basa su ricerche sottoposte a revisione paritaria e dati di validazione del produttore. È fornito a scopo educativo e non sostituisce il parere medico professionale. Consultare sempre un operatore sanitario qualificato per la diagnosi e le decisioni terapeutiche.